一、什么是流式荧光技术?
FISH,荧光原味杂交,应用荧光标记的DNA探针检测细胞中的特定基因是否表达、表达的量、是否异常、表达位置等信息,使用仪器是荧光显微镜;
融合基因,会提取检测细胞cDNA,应用已知融合基因引物kit,在RT-PCR仪检测进行扩增,如果存在融合基因,则可扩增出相应的产物,根据产物的荧光强度,还能检测出融合基因含量;
流式细胞术,使细胞形成单细胞悬液,应用荧光标记的抗体分子标记细胞,根据荧光分子表达情况检测细胞表面目的抗原。
关系:都应用荧光技术进行检测,
区别:检测的目的、方法、仪器均不同(顺带说一句,FISH和流式可以合作检测端粒酶,这种技术叫“FISH-Flow”因为是用流式仪检测的)
二、流式荧光免疫技术原理?
将荧光标记后的单细胞(或颗粒)悬液进入吸样管,进而随鞘液进入流动室。
进入流动室之前的管道变细,迫使鞘液从四周、样本在中心进入流动室,在外加压力的作用下由下向上(或由上向下)直线流动。
鞘液充满流动室将样品裹挟,当二者通过流动室喷嘴流出时,压力迫使鞘液包裹的液滴包含单一细胞或颗粒垂直通过检测区。
三、流式荧光技术怎么样?
紫色激光器荧光染料 405 nm 激发。适用于丰度较高的抗原。
绿色和黄绿色激光器的荧光染料 532 561 nm 激发。用于配有合适的滤光片通道的流式细胞仪光耐受强并且不依赖于PH值,是荧光显微镜技术的最佳选择
蓝光激光器荧光染料 488 nm 激发。适用于荧光显微镜技术。
红光激光器荧光染料 633 nm 激发。适用于配备氦氖激光器或红色二极管激光器的流式细胞仪。
四、流式芯片法
流式芯片法 - 为科学研究开辟新前景的重要工具
流式芯片法(Flow Cytometry)是通过使用光学和电子技术对细胞进行快速、高通量的分析和分选的一种强大技术。这项技术已经成为许多领域的研究人员们日常工作中不可或缺的工具之一。在过去的几十年里,流式芯片法在免疫学、细胞生物学、癌症研究、药物开发等多个领域取得了巨大突破。
流式芯片法的关键原理是通过将细胞悬浮液或血液样品以单个细胞为单位通过流式细胞仪进行检测与分析。这项技术结合了细胞生物学、光学和电子学的专业知识,可以帮助科研人员更加深入地了解细胞的特性和功能。
流式芯片法的工作原理
流式芯片法的工作原理非常复杂但同时又非常精确。从根本上说,流式芯片法是通过将细胞悬浮液注入到细长的流式细胞仪流道中,一次只通过一个细胞。当细胞流过激光束时,激光束会与细胞中的染料或标记物相互作用,产生荧光信号。流式细胞仪会收集这些信号,并根据信号的特征进行分析和分类。
在流式芯片法中,细胞的染色技术起到了至关重要的作用。通过使用特定的标记物或染料,可以针对细胞的特定分子或细胞表面的特征进行标记。这样一来,流式细胞仪可以根据这些标记的特征将细胞进行分类和分析。
流式芯片法在免疫学研究中的应用
流式芯片法在免疫学研究中发挥着重要的作用。通过使用流式芯片法,研究人员可以对免疫系统中的各种细胞类型进行精细的分析和表征。例如,研究人员可以通过流式芯片法追踪和分析特定免疫细胞亚群的数量和活性,进而揭示免疫系统在不同疾病状态下的功能和异常变化。
此外,流式芯片法也可以用于研究免疫细胞与病原体相互作用的机制。研究人员可以通过染色和标记细胞表面的特定受体或结合物,从而研究免疫细胞如何识别和与病原体进行相互作用。
在药物开发方面,流式芯片法也扮演着重要的角色。研究人员可以利用流式芯片法对药物分子在细胞中的作用进行动态监测和评估。这对于了解药物的作用机制以及对药物的疗效和安全性评估具有重要意义。
流式芯片法在癌症研究中的应用
流式芯片法对于癌症研究具有重要的影响。通过使用流式芯片法,研究人员可以对癌细胞进行高度准确的分析和分类。他们可以通过检测和分析癌细胞的特定标记物或突变基因,从而了解癌细胞的特性、分化程度和侵袭性等重要指标。
流式芯片法还可以帮助研究人员了解癌症发展的机制以及抗癌药物的疗效评估。通过分析癌细胞中的不同分子和信号通路的活性,研究人员可以挖掘新的治疗靶点,并为个性化的癌症治疗提供理论基础。
流式芯片法的发展与前景
随着科学技术的不断进步,流式芯片法在过去几十年间取得了长足的发展。从最初的单参数流式细胞仪到现在的多参数流式细胞仪,流式芯片法不断引入新的技术和分析手段,极大地提高了细胞分析和分选的速度和准确性。
未来,流式芯片法有望成为更为广泛应用的工具。随着技术的进步,流式细胞仪的分辨率和灵敏度将得到进一步提高,更多的细胞特征和机制可以被发现和研究。这将无疑有助于推动细胞生物学、免疫学、癌症研究等领域的发展,并为新药物开发和个性化治疗提供更好的支持。
结语
流式芯片法作为一项重要的科研工具,正在不断为科学研究开辟新的前景。通过流式芯片法,研究人员们可以更加准确地了解细胞的特性和功能,揭示疾病的机制以及评估药物的作用效果。未来,随着流式芯片法技术的不断发展,我们有理由相信,在这个领域将会有更多的突破和进展。
五、什么是流式技术?
就是把连续的影像和声音信息经过压缩处理后放上网站服务器,让用户一边下载一边观看、收听,而不要等整个压缩文件下载到自己的计算机上才可以观看的网络传输技术。
该技术先在使用者端的计算机上创建一个缓冲区,在播放前预先下一段数据作为缓冲,在网路实际连线速度小于播放所耗的速度时,播放程序就会取用一小段缓冲区内的数据,这样可以避免播放的中断,也使得播放品质得以保证。
六、流式荧光和化学发光的区别?
流式荧光,又称悬浮阵列、液相芯片等,是近20多年逐渐发展起来的多指标联合诊断技术。美国Luminex公司是主要仪器厂商之一。
化学发光是物质在进行化学反应过程中伴随的一种光辐射现象,可以分为直接发光和间接发光。
七、生物芯片技术的荧光探针是什么呢?
目前用荧光探针作为检测信号的仪器,主要是考虑荧光标记所要检测的DNA的效率,以及荧光探针本身的发光效率和光谱特性。
1.末端标记:在引物上标记有荧光探针,在DNA扩增过程时,使新形成的DNA链末端带有荧光探针。
2.随机插入:选择四种缄机基,使其中一种或几种挂有荧光探针,在PCR过程中,带有荧光探针的碱基和不带荧光探针的碱基,同时参与DNA链的形成。由于带有荧光探针的碱基,可能影响PCR的产物,因此,需要调整荧光标记的碱基与未标记的碱基比率,以使得PCR产量和带有荧光探针的碱基在DNA的插入率达到一个平衡的水平,使杂交信号最强。主要考虑以下几个因素:荧光探针的激发和发射频谱;荧光探针的发光效率;荧光探针对PCR或逆转录效率的影响;不同荧光探针的发射光谱是否有重叠。常用的荧光探针:FITC,CY-3,ALEAX488,CY-5,ALEAX564
八、做流式实验荧光强度达到多少合适?
流式荧光技术最高的检测下限可达0.01 pg/ml,常规的酶联免疫吸附试验(ELISA)仅为μg级,比后者检测的灵敏度提高10—100倍。
九、流式细胞技术检测目的?
流式细胞术工作原理是在细胞分子水平上通过单克隆抗体对单个细胞或其他生物粒子进行多参数、快速的定量分析。它可以高速分析上万个细胞,并能同时从一个细胞中测得多个参数,具有速度快、精度高、准确性好的优点,是当代最先进的细胞定量分析技术之一。
光源、液流通路、信号检测传输和数据的分析系统是流式细胞仪的主要组成。临床中运用流式细胞仪进行外周血白细胞、骨髓细胞以及肿瘤细胞等的检测是临床检测的重要组成部分。
十、sted荧光技术原理?
STED 受激辐射损耗显微术(Stimulated emission depletion microscopy)称为STED技术。成像原理:利用荧光饱和与激发态荧光受激损耗的非线性关系。核心思想:利用受激辐射选择性消耗激发光斑中边沿区域的激发态荧光分子从而减少有效荧光的发光范围。